高通量藥敏檢測指導兒童急性白血病個體化治療的初步探索——摘要、資料與方法
摘要
目的
探究高通量藥敏（high-throughput drug sensitivity,HDS）檢測技術在兒童復發(fā)難治性急性白血?。╮elapsed and refractory acute 1eukermia,RR-AL）的應用現狀及分析挽救治療方案的可行性。
方法
回顧性收集2021年11月—2023年10月鄭州大學第一附屬醫(yī)院兒童血液與腫瘤科行HDS檢測的RR-AL患兒的臨床資料，并對藥敏結果及治療結局進行分析。
結果
17例RR-AL患兒接受HDS檢測，復發(fā)難治性急性髓系白血病7例（41%），復發(fā)難治性急性淋巴細胞白血病10例（59%）。高度敏感化療藥物/方案的檢出率為53%（9/17），中度敏感化療藥物/方案的檢出率為100%（17/17）。17例RR-AL患兒高度敏感度和中度敏感度化療藥物及方案中，MOACD方案（米托蒽醌+長春新堿+阿糖胞苷+環(huán)磷酰胺+地塞米松）占比100%，單藥米托蒽醌抑制率最高（94%，16/17），靶向藥抑制率最高為硼替佐米（94%，16/17）。9例患兒根據HDS結果調整化療，行造血干細胞移植4例；無病生存4例，死亡5例。8例經驗化療，行造血干細胞移植2例；無病生存4例，死亡4例。
結論
HDS檢測技術可為兒童RR-AL篩選出高度敏感藥物/方案，提高再次緩解率，為后續(xù)進行造血干細胞移植創(chuàng)造條件。
引言
復發(fā)難治性急性白血?。╮elapsed and refractory acute 1eukermia,RR-AL）是嚴重危及兒童生命的血液系統(tǒng)惡性腫瘤，長期生存率僅30%左右，已成為兒童急性白血病死亡的主要原因之一。指南多推薦加入臨床試驗或采用新型的組合方案進行挽救性化療，然而盲目試藥效果往往欠佳，最終導致不良預后。如何制定RR-AL個性化用藥方案來提高治療緩解率是臨床熱點探討并亟待解決的難題。高通量藥敏（high-throughput drug sensitivity,HDS）檢測技術是一種新興的可再生原代癌細胞藥敏檢測技術，一次可檢測上百種藥物，實現高通量檢測化療藥、靶向藥、化療聯合方案的藥敏，為精準治療提供了一個有力的工具。HDS檢測技術已被報道成功應用于卵巢癌、骨髓增生異常綜合征、晚期肺癌、成人RR-AL患者的治療中，兒童患者相關研究報道少見。本研究回顧性分析我中心17例進行HDS檢測的兒童RR-AL的臨床資料，探討HDS在兒童RR-AL中的應用價值。
1資料與方法
1.1研究對象
回顧性收集2021年11月—2023年10月于鄭州大學第一附屬醫(yī)院兒童血液與腫瘤科行HDS檢測的17例RR-AL患兒的臨床資料、HDS結果及治療結局。RR-AL定義為：（1）用標準誘導緩解方案治療2個療程未達部分緩解者；（2）首次緩解后6個月內復發(fā)者（又稱“早期復發(fā)”）；（3）首次緩解6個月后復發(fā)，但用原誘導緩解方案再次治療失敗者；（4）多次復發(fā)者。復發(fā)定義為：骨髓中白血病細胞超過5%（又稱“髓內復發(fā)”）；或出現骨髓以外部分的白血病病變（又稱“髓外復發(fā)”）。該研究已通過鄭州大學第一附屬醫(yī)院倫理委員會批準并免除知情同意（2024-KY-0313-002）。
1.2 HDS檢測方法
收集患兒骨髓液4 mL或外周血8 mL，保證無溶血、凝血、污染，48 h內送檢，腫瘤細胞比例>70%。樣本送中科普瑞昇醫(yī)學檢驗實驗室有限公司進行HDS檢測。分離單核細胞，加完全培養(yǎng)液培養(yǎng)24 h。待測藥物包括急性髓系白血病（acute myeloid leukemia,AML）和急性淋巴細胞白血?。╝cute lymphocyte leukemia,ALL）的一線及二線化療用藥、部分實體瘤化療藥物、靶向用藥的單藥及組合方案，共有4種方案（88、119、120、121種藥物/方案）。將待測藥物溶于二甲基亞砜（dimethyl sulfoxide,DMSO）中，按照臨床劑量對應的100％血漿峰濃度配置藥物，儲存于384孔透明藥板，采用同等體積的DMSO溶劑作為對照。在96孔板中按每孔10萬個細胞/mL濃度接種細胞50μL，培養(yǎng)72 h后，每孔中加入20μL的CellCounting-Lite2.0工作液，誘導細胞裂解，靜置10 min，多功能酶標儀（Perkin Elmer-EnVision 2015）讀數，得出對應的每孔相對熒光值（relative light unit,RLU）。待測化合物的RLU藥物與DMSO對照組RLUDMSO進行預處理，計算待測藥物對癌細胞的生長抑制率，抑制率（％）=（1-藥物篩選組腫瘤細胞存活數目/空白對照組腫瘤細胞存活數目）×100％。
1.3 HDS檢測結果的應用
篩選方案的實施過程：（1）參考HDS檢測報告及相關文獻［6］，藥物高度、中度、低度敏感及不敏感分別定義為抑制率≥80％、≥50％且<80％、≥20％且<50％、<20％；（2）參考NCCN指南、《臨床腫瘤內科手冊》、國內專家共識確定藥物使用劑量、方法、順序和頻次；（3）臨床醫(yī)生綜合考慮患兒用藥禁忌、身體耐受能力、用藥史、經濟承受能力等，監(jiān)測不良反應，并及時對癥處理；（4）應用篩選方案，最多不超過3個療程。獲得一定療效后，若有合適的供者，及時行造血干細胞移（hematopoietic stem cell transplantation,HSCT）。
1.4療效評價
粒細胞缺乏期結束后評估療效，骨髓涂片原始和幼稚細胞比例小于5％，判定為骨髓形態(tài)學緩解；流式細胞儀檢測白血病細胞比值，低于0.01％，判定為微小殘留病（minimal residual disease,MRD）轉陰。末次隨訪時間為2023年12月31日。