諾卡菌菌株分離、鑒定、抗菌藥物敏感性試驗(yàn)——摘要、材料與方法
摘要:目的分析諾卡菌病的臨床特點(diǎn)和諾卡菌的耐藥性，為臨床診治提供幫助。方法回顧南陽(yáng)市中心醫(yī)院2018年2月一2023年2月諾卡菌培養(yǎng)陽(yáng)性的32例患者，分析感染病例的臨床資料，包括一般資料、發(fā)病癥狀、基礎(chǔ)疾病、病原菌鑒定、實(shí)驗(yàn)室檢查、胸部CT、臨床診斷、治療與轉(zhuǎn)歸。采用微量肉湯稀釋法進(jìn)行諾卡菌體外藥敏試驗(yàn)。
結(jié)果32例諾卡菌培養(yǎng)陽(yáng)性的患者，8例判為定植，呼吸道定植率為29.17%。感染最常見的菌種是皮疽諾卡菌，其次是蓋爾森基興諾卡菌。24例感染患者，男15例，女9例，年齡17~91歲，平均(59.46±18.59)歲。肺部感染者17例，多數(shù)伴有基礎(chǔ)疾病，常見的有慢性阻塞性肺疾病(COPD)(5例)、支氣管擴(kuò)張(3例)、糖尿病(2例)、肺結(jié)核(2例)、艾滋病(1例)，所有患者都表現(xiàn)出咳嗽、咳痰，半數(shù)以上伴發(fā)熱。胸部CT表現(xiàn)以不同形狀的高密度影最常見，其中斑片影最多(70.6%),58.8%的患者表現(xiàn)為結(jié)節(jié)影。
皮膚軟組織感染者7例，6例伴有基礎(chǔ)疾病或危險(xiǎn)因素，如糖尿病患、腎病綜合征或局部穿刺、傷口污染史。感染患者，C反應(yīng)蛋白、IL-6和血沉(ESR)升高者均在80%以上，白細(xì)胞和中性粒細(xì)胞升高者均為50.00%，58.33%的患者伴低蛋白血癥。肺部皮疽諾卡菌感染組血小板(PLT)和纖維蛋白原(FIB)水平均高于非皮疽諾卡菌感染組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.02和P=0.03)。諾卡菌對(duì)甲氧芐芐胺嘧嘧啶/磺胺甲惡唑、利奈唑胺和阿米卡星100%敏感，對(duì)克拉霉素的耐藥率最高(80.0%)，對(duì)多西環(huán)素的中介率最高(86.7%)。
皮疽諾卡菌對(duì)莫西沙星和阿莫西林/克拉維酸的敏感性均在80%以上。半數(shù)以上患者采用基于甲氧芐芐胺嘧嘧啶/磺胺甲惡唑?yàn)橹鞯穆?lián)合治療方案。治療后，23例(95.83%)患者好轉(zhuǎn)出院。結(jié)論諾卡菌對(duì)甲氧芐芐胺嘧嘧啶/磺胺甲惡唑、利奈唑胺和阿米卡星的敏感性最高。諾卡菌肺病臨床癥狀無(wú)明顯特異性，胸部CT有助于診斷，及早識(shí)別病原菌、根據(jù)藥敏結(jié)果選用敏感抗菌藥物是有效治療、改善預(yù)后的關(guān)鍵。PLT和FIB可能參與皮疽諾卡菌引起的肺部炎癥反應(yīng)。
諾卡菌(Nocardia)是革蘭陽(yáng)性、需氧、生長(zhǎng)緩慢的放線菌，普遍存在于土壤、腐爛的植被和水中。在被有效命名的119種諾卡菌中，有超過(guò)40種具有致病潛力，它們主要通過(guò)呼吸道或外傷進(jìn)入人體，在免疫力低下或免疫正常的人群中引起肺部、皮膚、腦甚至全身播散性感染。諾卡菌感染呈逐年增多的趨勢(shì)，臨床癥狀多樣化，尤其是肺諾卡菌病易與肺結(jié)核、肺結(jié)節(jié)病甚至肺癌相混淆，易延誤診斷和治療，導(dǎo)致預(yù)后不良。諾卡菌病的治療周期長(zhǎng)，藥物敏感模式在不同菌種、不同地區(qū)和不同時(shí)間上存在較大差異，且隨著抗菌藥物的廣泛使用，一些菌株已經(jīng)對(duì)不同抗菌藥物產(chǎn)生了較高的耐藥性，本研究分析諾卡菌感染的臨床特點(diǎn)和耐藥性，旨在為諾卡菌的早期診治、及時(shí)治療提供方法和依據(jù)。
1材料和方法
1.1病例來(lái)源
收集2018年2月一2023年2月我院培養(yǎng)出諾卡菌的住院患者，共32例。諾卡菌感染診斷的細(xì)菌學(xué)標(biāo)準(zhǔn):痰標(biāo)本培養(yǎng)至少2次陽(yáng)性;在無(wú)菌操作條件下取得的肺、皮膚、皮下膿腫的病灶組織或腦脊液，或經(jīng)支氣管鏡取得支氣管肺泡灌洗液，經(jīng)普通培養(yǎng)或第二代測(cè)序技術(shù)檢測(cè)、組織病理學(xué)等方法證實(shí)諾卡菌陽(yáng)性的患者。播散性諾卡菌感染診斷標(biāo)準(zhǔn):≥2個(gè)不相鄰器官明確有諾卡菌的感染。肺部感染的診斷需符合《中國(guó)成人社區(qū)獲得性肺炎診斷和治療指
1.2菌株培養(yǎng)和鑒定
諾卡菌的培養(yǎng)在2021年11月前使力平板分離，2021年11月養(yǎng)瓊脂平板(簡(jiǎn)稱“自來(lái)水平板”)聯(lián)合延長(zhǎng)培養(yǎng)增加培養(yǎng)陽(yáng)性率。自來(lái)水平板的配制:1.3g瓊脂粉加入100mL自來(lái)水中，121℃高壓滅菌30min，冷卻至55℃混勻倒板，測(cè)試無(wú)菌試驗(yàn)后使用。菌種鑒定根據(jù)鏡下形態(tài)(革蘭染色和弱抗酸染色)、菌落形態(tài)以及質(zhì)譜鑒定進(jìn)行初步鑒定，用16S rRNA、secAl基因擴(kuò)增測(cè)序進(jìn)行最終鑒定。收集臨床資料，包括姓名、性別、年齡、職業(yè)、科室、發(fā)病癥狀、基礎(chǔ)疾病、實(shí)驗(yàn)室檢查(包括血常規(guī)、C反應(yīng)蛋白、紅細(xì)胞沉降率、降鈣素原等)、胸部CT、診斷、治療方案及預(yù)后和轉(zhuǎn)歸。
1.3儀器與試劑
血平板、巧克力平板、Autofmc1000基質(zhì)輔助激光解析電離飛行時(shí)間質(zhì)譜儀均來(lái)自鄭州安圖生物工程股份有限公司;二氧化碳培養(yǎng)箱(型號(hào)Galaxyl70R)來(lái)自Eppendorf公司;瓊脂粉購(gòu)于天津致遠(yuǎn)化學(xué)試劑有限公司，oCelloScope微生物快速藥敏監(jiān)測(cè)系統(tǒng)來(lái)自丹麥BioSense公司。質(zhì)控菌株金黃色葡萄球菌ATCC 29213、大腸埃希菌ATCC35218(僅用于阿莫西林/克拉維酸)來(lái)自國(guó)家衛(wèi)生健康委員會(huì)。
1.4抗菌藥物敏感性試驗(yàn)
用微量肉湯稀釋法測(cè)定諾卡菌分離株對(duì)常用抗菌藥物的最小抑制濃度(minimum inhibitory concentration,MIC)，包括阿米卡星、阿莫西林/克拉維酸、頭孢吡肟肟、頭孢曲松、環(huán)丙沙星、克拉霉素、多西環(huán)素、亞胺培南、利奈唑胺、米諾環(huán)素、莫西沙星、妥布霉素、甲氧芐芐啶/磺胺甲惡唑(SXT)等。具體試驗(yàn)方法和藥敏折點(diǎn)判斷標(biāo)準(zhǔn)參照美國(guó)臨床和實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)協(xié)會(huì)CLSI M24 2rd ed和CLSI M62 2018文件。
1.5統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
采用SPSS19.0進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，符合正態(tài)分布的計(jì)量資料用均值±標(biāo)準(zhǔn)差(x±s)表示，兩組間采用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)。不符合正態(tài)分布的計(jì)量資料用中位數(shù)(四分位數(shù))[M(P25，P75)]表示。
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