3種松乳菇菌絲體生長情況及生物學(xué)特性（一）
松乳菇(Laclariusdeliciosus)為擔(dān)子菌亞門、層菌綱、傘菌目、紅菇科、乳菇屬，易與松樹等形成外生菌根的食用菌，具有藥用食用的雙重價值。靚麗乳菇是松乳菇家族中子實體顏色為橙黃色的一類，屬擔(dān)子菌門，紅菇目，紅菇科，乳菇屬的一種大型真菌，貴州又稱松菌、松毛菌。紅汁乳菇呈紫銅色，無辛辣味，口感比橙黃色松乳菇細膩。多汁乳菇子實體呈較暗的紅褐色，菌柄折斷后會流出較多汁液，俗稱奶漿菌。
松乳菇常生長在櫟樹和馬尾松成片的混交林地，且以馬尾松較小、櫟樹較細、松針葉和櫟樹葉為主的腐殖質(zhì)表層林地里發(fā)生較多。由于菌絲脫離共生樹種的根系不能形成子實體，目前還難以實現(xiàn)人工栽培。本試驗對3種松乳菇菌種設(shè)置相同的母種、原種和液體種培養(yǎng)基，分別接種靚麗乳菇、多汁乳菇和紅汁乳菇菌種，研究3種松乳菇菌絲體生長情況，以掌握3種松乳菇生物學(xué)特性，為人工馴化栽培提供參考。
1材料與方法
1.1試驗材料
靚麗乳菇、多汁乳菇和紅汁乳菇3個松乳菇菌株由鎮(zhèn)遠縣黔康源生態(tài)農(nóng)業(yè)發(fā)展有限公司和貴州大學(xué)分別從鎮(zhèn)遠縣羊場鎮(zhèn)和貴陽市花溪區(qū)黔陶鄉(xiāng)收集，在貴州大學(xué)農(nóng)學(xué)院園藝實驗室純化培養(yǎng)并供試驗。
試管母種培養(yǎng)基：馬鈴薯200 g，葡萄糖20 g，瓊脂20 g，磷酸二氫鉀0.5 g，牛肉膏2 g，水1 000 mL,pH值7。
原種固體培養(yǎng)基：松木屑35%、麥粒35%、玉米芯10%、麥麩18%、石膏1%、過磷酸鈣0.5%、糖0.5%，尿素0.5%，硫酸鎂0.1%，培養(yǎng)基含水量60%～65%,pH值7。
液體種培養(yǎng)基：馬鈴薯100 g，紅糖15 g，葡萄糖10 g，麥麩20 g，蛋白胨20 g，磷酸二氫鉀2 g，硫酸鎂1 g，維生素B10.5 g，pH值7。
1.2試驗方法
1.2.1菌種的分離(孢子分離法)
1)種菇的選擇
挑選靚麗乳菇、多汁乳菇和紅汁乳菇3種松乳菇菇蓋肥厚，菇形圓整，菇柄粗壯的單生子實體作為種菇。種菇的菌膜將開而未開，達8～9成成熟度。
2)孢子收集器準備
在超凈工作臺內(nèi)將瓷盆襯4～6層紗布，上面放一只中號的培養(yǎng)皿，皿內(nèi)放一個不銹鋼三角架(供插種菇之用)，再在瓷盆上加蓋一只玻璃大漏斗，將孔塞上棉塞，對超凈工作臺殺菌消毒。
表1不同松乳菇菌株母種菌絲的生長情況比較
3)孢子的采取及試管母種培養(yǎng)
在超凈工作臺內(nèi)，用鑷子分別將3種松乳菇種菇浸入0.1%～0.2%的升汞水溶液中浸泡1 min，取出用無菌水沖洗1～2次，再用滅菌的紗布吸干菇體表面的漬水，輕輕掀開玻璃漏斗，用消毒過的鑷子夾種菇迅速插入三角架上，馬上蓋好，用紗布將漏斗周圍塞好，并在紗布上倒0.1%的升汞水。然后將孢子收集皿放入恒溫室中培養(yǎng)，使其孢子落下。恒溫室溫度控制在18～20℃之間。當培養(yǎng)皿內(nèi)有1層淡咖啡色的粉末時即是孢子，應(yīng)立即進行接種，將斜面培養(yǎng)基及所需用具用0.1%KMnO4抹洗表面，并將滅菌過的注射器一同放入超凈工作臺內(nèi)消毒，按無菌操作接種后，隨即放于23～28℃恒溫箱中培養(yǎng)，經(jīng)9～12 d培養(yǎng)基表面可看到白色星芒狀的菌絲叢。
孢子萌發(fā)菌絲后，取先端菌絲及時轉(zhuǎn)入普通PDA培養(yǎng)基進行培養(yǎng)，菌絲生長穩(wěn)定后，轉(zhuǎn)入本試驗試管斜面母種培養(yǎng)基培養(yǎng)，每個品種接種10支試管，3次重復(fù)。觀察測定菌絲長勢、滿管時間、菌絲生長速度。滿管后的菌種，放入4℃左右的冰箱保藏備用。
1.2.2液體種培養(yǎng)基接種、培養(yǎng)
先按本試驗液體種培養(yǎng)基配方稱量麥麩浸泡30 min，然后將去皮土豆切片與麩皮混合后煮熟30 min，過濾取濾液。將精確稱量的磷酸二氫鉀、硫酸鎂等輔料與土豆、麥麩的濾液充分攪拌均勻，然后把制作好的液體菌種培養(yǎng)基靜置一段時間，待其中的固體物質(zhì)沉淀后取上清液裝入三角瓶，裝入500 mL三角瓶內(nèi)，每瓶裝量為100 mL，加入15粒左右的小玻璃珠，用棉塞封口后置1.5 kg壓力下滅菌30 min，取出待溫度為30℃時接種。每瓶接入1.5～2 cm2的斜面菌種一塊，讓其懸浮于液體培養(yǎng)基表面且使菌絲朝上，在適溫下靜置培養(yǎng)48 h。接種完后塞緊塞子，貼上標簽。每個品種接種5瓶，3次重復(fù)。當菌絲長至液體培養(yǎng)基中時，置搖床上進行振蕩培養(yǎng)。往復(fù)式搖床振蕩頻率為80～100次·min-1，振幅6～10 cm。將接種好的三角瓶放到25～28℃的環(huán)境中進行避光靜止培養(yǎng)72 h后，將已經(jīng)萌發(fā)并且沒有雜菌污染的三角瓶放到回旋式搖床上進行培養(yǎng)，讓3種松乳菇培養(yǎng)瓶保持相同轉(zhuǎn)速勻速轉(zhuǎn)動，搖床搖速控制在160～200次·min-1之間,控制液體菌種培養(yǎng)液的培養(yǎng)溫度在24～26℃之間。
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