牦牛源多殺性巴氏桿菌C47-8株體外生長(zhǎng)曲線的測(cè)定結(jié)果
牦牛出血性敗血癥是由多殺性巴氏桿菌（Pasteurella multocida，P.multocida）引起的牦牛的一種以高熱、肺炎、間或呈現(xiàn)急性胃腸炎以及內(nèi)臟器官?gòu)V泛出血為特征的急性傳染病，被列為青海省重點(diǎn)防控的疫病之一。
根據(jù)GenBanK中發(fā)表的多殺性巴氏桿菌（Pasteurella multocida，P.multocida）HN06株（登錄號(hào)為NC017027）的ompH核苷酸序列設(shè)計(jì)合成一對(duì)特異性引物，將PCR擴(kuò)增獲得的牦牛源P.multocida C47-8的ompH基因片段連接到pMR10載體上，構(gòu)建了C47-8株ΔompH缺失株互補(bǔ)質(zhì)粒pMR10-ΔompH，并將該質(zhì)粒電轉(zhuǎn)化至C47-8ΔompH缺失株中，成功獲得其互補(bǔ)菌株。
在此基礎(chǔ)上，對(duì)C47-8親本株、ΔompH缺失株以及互補(bǔ)株的生物學(xué)特性進(jìn)行研究。形態(tài)學(xué)觀察結(jié)果表明，3株菌的生長(zhǎng)形態(tài)無(wú)差異；生化試驗(yàn)結(jié)果表明，除了缺失株發(fā)酵蕈糖、硝酸鹽試驗(yàn)呈現(xiàn)陽(yáng)性外，3株菌的其余生化特性未發(fā)生改變；體外生長(zhǎng)曲線表明親本株C47-8的生長(zhǎng)速度比缺失株和互補(bǔ)株的生長(zhǎng)速度慢，說(shuō)明ompH基因?qū)47-8的生長(zhǎng)有顯著影響。本試驗(yàn)為深入研究P.multocida的致病機(jī)制以及研制安全有效的基因缺失減毒活疫苗奠定了基礎(chǔ)。
體外生長(zhǎng)曲線的測(cè)定按文獻(xiàn)的方法測(cè)定3個(gè)菌株的OD600值，繪制細(xì)菌體外生長(zhǎng)曲線，每個(gè)菌株做3個(gè)重復(fù)，用SPSS19.0軟件進(jìn)行分析，并根據(jù)生長(zhǎng)曲線測(cè)定出細(xì)菌的代時(shí)。
體外生長(zhǎng)曲線的測(cè)定將P.multocida菌液每隔1 h測(cè)定3次OD600值，將得到的數(shù)據(jù)用SPSS19.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，并繪制體外生長(zhǎng)曲線，結(jié)果見(jiàn)下圖。
C47-8親本株、缺失株和互補(bǔ)株體外生長(zhǎng)曲線的測(cè)定結(jié)果
從圖可知，親本株生長(zhǎng)速度較慢，而缺失株和互補(bǔ)株則生長(zhǎng)速度較快，由此可以確定ompH基因明顯影響了C47-8的生長(zhǎng)。
根據(jù)生長(zhǎng)曲線測(cè)定出細(xì)菌的代時(shí)（G）C47-8親本株代時(shí)為1.248 h，缺失株為0.727 h，互補(bǔ)株為0.765 h。表明C47-8親本株代時(shí)最長(zhǎng)，互補(bǔ)株居中，缺失株最快，說(shuō)明ompH基因的缺失影響了P.multocida的生長(zhǎng)。
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