?酵母菌生長(zhǎng)周期及生長(zhǎng)曲線測(cè)定操作步驟
酵母菌生長(zhǎng)曲線測(cè)定操作步驟
（1）酵母菌活化。在無(wú)菌條件下，將1%酵母粉末加入滅菌后的5%葡萄糖溶液中。置于28℃搖床中振蕩培養(yǎng)（轉(zhuǎn)速200 r·min-1）活化3 h。
（2）酵母菌的YEPD液體培養(yǎng)。按1%比例將酵母菌液轉(zhuǎn)移到新培養(yǎng)基中，置于28℃搖床振蕩培養(yǎng)（轉(zhuǎn)速200 r·min-1）5 h，將酵母培養(yǎng)至對(duì)數(shù)期，可冷藏保存。
（3）酵母菌的生長(zhǎng)曲線。從搖晃均勻后的酵母菌YEPD液體培養(yǎng)基中無(wú)菌取出菌液，加入到滅菌過(guò)的新鮮YEPD液體培養(yǎng)基中，每間隔2 h測(cè)定吸光度數(shù)值，最終測(cè)得24 h的吸光度，用稀釋后的混合液吸光度乘以相應(yīng)的稀釋倍數(shù)得吸光度數(shù)值。以接種后0 h、2 h、4 h、6 h、8 h、10 h、12 h、14 h、16 h、18 h、20 h、22 h和24 h為橫坐標(biāo)，以吸光度乘以相應(yīng)稀釋倍數(shù)為縱坐標(biāo)，最終繪制出酵母細(xì)胞24 h的生長(zhǎng)曲線。
結(jié)果
酵母菌的生長(zhǎng)曲線
單細(xì)胞微生物的生長(zhǎng)過(guò)程通常分為4個(gè)階段，即適應(yīng)期、對(duì)數(shù)期、穩(wěn)定期和衰亡期。由圖1知，酵母菌的生長(zhǎng)曲線清晰地反映了酵母菌的4個(gè)生長(zhǎng)階段，初始階段0～5 h為酵母菌生長(zhǎng)的遲滯期；5～14 h的生長(zhǎng)曲線呈大幅上升趨勢(shì)，酵母菌經(jīng)過(guò)短暫的適應(yīng)期后快速生長(zhǎng)，開(kāi)始大量繁殖，發(fā)酵速度明顯加快，菌種數(shù)量增多，說(shuō)明酵母菌進(jìn)入了生長(zhǎng)對(duì)數(shù)期；14～22 h產(chǎn)生大量的次生代謝產(chǎn)物使得pH值下降，酵母菌生長(zhǎng)環(huán)境惡劣，此時(shí)生長(zhǎng)速度下降，酵母細(xì)胞的對(duì)數(shù)生長(zhǎng)階段結(jié)束進(jìn)入穩(wěn)定生長(zhǎng)階段，活菌數(shù)目變化不大，培養(yǎng)22 h后酵母菌的數(shù)量達(dá)到峰值。22 h以后，酵母菌的生長(zhǎng)呈緩慢的下降趨勢(shì)，是酵母菌生長(zhǎng)的衰亡期。
圖1酵母菌的生長(zhǎng)曲線
綜上可知，此高活性酵母的對(duì)數(shù)期在5～14 h。在酵母細(xì)胞穩(wěn)定期，酵母細(xì)胞的生長(zhǎng)速率和死亡速率達(dá)到基本平衡，此時(shí)酵母細(xì)胞的總體個(gè)數(shù)保持基本不變，所以不適合測(cè)定。而在對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期酵母的生長(zhǎng)速率遠(yuǎn)遠(yuǎn)大于死亡速率，以最快速度進(jìn)行繁殖，此時(shí)的酵母菌細(xì)胞活性旺盛，細(xì)胞個(gè)體形態(tài)及生理指標(biāo)都較為穩(wěn)定，所以本實(shí)驗(yàn)選取酵母為對(duì)數(shù)期酵母。
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